作者：廖吉彥、胡仲祺、張清安、鄧汀欽*

摘要：

從彰化縣社頭及二水等地鳳梨 [Ananas comosus (L.) Merr.] 栽種區採集罹患萎凋病的台農2號鳳梨植株 (代號：Pa1) 及果實，經電子顯微鏡觀察、電泳分析、病毒鞘蛋白核酸與胺基酸序列比較、鞘蛋白基因之表現蛋白製作抗血清及其西方轉漬反應，證實在鳳梨萎凋病的病株中有屬於鳳梨介殼蟲萎凋-相關病毒-1 (Pineapple mealybug wilt-associated virus-1, PMWaV-1)。而其果實上分離到的介殼蟲經鑑定為鳳梨嫡粉介殼蟲 [Dysmicoccus brevipes (Cockerell)]。利用電子顯微鏡以陰染法觀察，病毒顆粒為長絲狀，大小約1250-1300 × 12-15 nm。從病毒RNA 3' 端解序783個核苷酸屬於鞘蛋白基因，與GenBank中的PMWaV-1 (Access No. AF414119) 比較鞘蛋白基因之核苷酸，其相同度達99.1%，而其胺基酸相似度則為98.4%。將病毒鞘蛋白基因以限制酶切割後，再以DNA ligation kit粘接至pET28b (+) 載體，轉殖於DH5菌株，並於Escherichia coli BL21 (DE3) 菌株表現蛋白，經電泳分析該表現蛋白之分子量約為27 kDa。經注射白兔製備抗血清，以西方轉漬反應顯示自製的抗體與病毒鞘蛋白基因表現蛋白及侵染Pa1植株的病毒鞘蛋白有同源 (homologous) 反應。因此利用病毒鞘蛋白基因的表現蛋白所製備的抗體即可作檢測之用，本報告為台灣地區鳳梨萎凋病的病原PMWaV-1之鑑定首篇紀錄。

關鍵字：鳳梨介殼蟲萎凋-相關病毒-1、鞘蛋白基因、表現蛋白、序列比對

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