作者：江芬蘭、張清安、鄭櫻慧、陳金枝*

摘要：

本研究於梅峰地區採集獲得葉片呈現黃綠斑駁病徵之百子蓮植株，取其葉片接種於奎藜（Chenopodium quinoa Willd ) ，經連續3次單斑接種後獲得一分離株（AL-1）。將AL-1回接於百子蓮實生苗植株亦可造成與田間病株類似之斑駁病徵。以接種AL-1之奎藜葉片為材料，利用高低速交替及硫酸鉋等密度平衡離心進行病毒純化，純化試料經電子顯微鏡觀察，病毒顆粒為絲狀，長度預估約508nm。純化病毒經SDS-PAGE電泳分析顯示其鞘蛋白乃由單一種蛋白質基本單位(protein subunit)所構成，分子量估算馮25 kDa。將純化之AL-1病毒顆粒注射於白兔後所製備之多元抗體於ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)、SDS-免疫擴散反應（SDS-immunodiffusion test ) 及西方轉漬法反應中，可與同源之純化病毒抗原及百子蓮罹病株發生反應。以萃取自接種AL-1之奎藜病葉之全量核酸為模版，利用數組本研究所設計之引子對分別進行病毒全長度基因體之RT-PCR 核酸增幅與選殖，定序結果確認AL-1分離株之全長基因體約由6577 個核苷酸所組成（不包含PolyA），內含5個轉譯架構（ORF 1-5）分別對應5 種基因產物。其中ORF 2-3 含有彼此重疊之序列，此等基因體結構與已知之Potexvirus屬病毒相同。經比對GenBank上已登錄之其他10 種Potexviruses 全長基因體序列後顯示，AL-1基因體之核苷酸與胺基酸序列均與Nerine virus X (NVX)最為相近，相同度高達93％以上。針對AL-1之ORF1及鞘蛋白基因所分別設計之二種引子對，均可以專一性地檢測出AL-1。基於前述AL-1分離株之生物特性、血清學以及全長度基因體之分析結果，證實本研究於呈現黃綠條紋及斑駁病徵之百子蓮所分離之病毒應為NVX病毒之一個系統，此乃NVX於台灣發生之首度報導。

關鍵字：百子蓮、病毒病、Nerine virus X病毒、多元抗體、全長基因體、RT-PCR檢測

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