作者：陳金枝*、張郁靈、林碧雲、江芬蘭、鄭櫻慧、鄧汀欽

摘要：

2011 年初於國外進口之百合種球首次以核酸檢測法檢出一種屬於Potexvirus 之病毒核酸片段，由核酸序列鑑定確認其為國外已報告之車前草嵌紋病毒 (Plantago asiatica mosaic virus; PlAMV)。進一步依據GenBank 上已登錄之PlAMV 核酸序列，設計可增幅全長度鞘蛋白基因序列之引子對PlAMV-cpup (5'-CCGCGGCCGCCACACTACTC) 及PlAMV-cpdw (5'-GGCCCACCAGACTTTCACT)，針對進口百合種球之罹病組織 (代號LV1) 之全量核酸進行RT-PCR 檢測，可增幅出預估933 bp 之核酸片段產物，此核酸片段進一步選殖與定序結果，證實其帶有PlAMV 之全長度鞘蛋白基因，且與GenBank 上已登錄之PlAMV 病毒 (accession no. AB360794.1) 之鞘蛋白胺基酸序列相同度高達93% 以上。利用細菌表現蛋白系統所生成之PlAMV-LV1 鞘蛋白作為抗原進行抗血清製備，所製備出之PlAMV-LV1 多元抗體可成功應用於Indirect ELISA (Indirect enzyme-linked immunosorbent assay) 及西方轉漬法 (western blotting) 等血清檢定法而專一性地檢出此病毒，並發現以直接組織轉漬法 (direct tissue blotting; DTB) 於植株不同部位組織上對此百合病毒的檢出率均顯著高於用ELISA 檢測的結果；植株地下部之病毒檢出率，由根系檢出者顯著地高於由種球鱗片檢出者。運用PlAMV-cpup/PlAMV-cpdw 引子對，可應用於不同品系百合的PlAMV CP 之RT-PCR 檢測。由上述結果顯示，本研究所開發之PlAMV 血清與核酸檢測試劑，可應用於百合之PlAMV 檢定，尤其DTB 法為一種可有效地提升百合檢出PlAMV 的血清檢定方式。

關鍵字：百合病毒病、車前草嵌紋病毒、血清製備、直接組織轉漬法、RT-PCR 檢測

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