作者：陳金枝、張清安*、江芬蘭

摘要：

由未呈現病徵之火球花 (Haemanthus multiflorus Martyn) 植株葉片，經機械接種於奎藜 (Chenopodium quinoa Willd.) 葉片後出現局部斑點病徵，以3 次連續單一斑點分離獲得1 個分離株 (HM4)。將感染HM4之火球花及其接種後之奎藜單斑組織於間接式- 酵素連結免疫分析法 (indirect enzyme-linked immunesorbent assay; indirect ELISA) 及西方墨點法中，均可與已知之Nerine latent virus (NeLV) 金花石蒜分離株 (NeLV-LY56)之抗血清產生正反應。於反轉錄-聚合酶連鎖反應 (reverse transcription-polymerase chain reaction; RT-PCR) 中應用NeLV-up/Oligo-d(T)₁₄ 引子對，可增幅出HM4 基因體核酸3’ 端約1.5 kbp 之片段，經解序後證實此片段涵蓋NeLV 之全長度鞘蛋白 (coat protein; CP) 及富含半胱氨酸蛋白 (cysteine-rich protein; CRP) 之轉譯架構(open reading frame)。將HM4 及其他6 個選殖自火球花之Carlavirus 屬病毒分離株核酸序列，與GenBank上已登錄之NeLV (Acc. no. JQ395044) 進行分析比對，結果顯示此等病毒序列於鞘蛋白核苷酸及胺基酸相同度(identity) 均可達96–99%，確認HM4 及其他6 個選殖序列均為NeLV。將此7 個火球花NeLV 選殖株與來自金花石蒜 (Lycoris aurea)、孤挺花 (Hippeastrum hybridum Hort.) 及水仙 (Narcissus spp.) 之NeLV 分離株之CP 序列進行類緣分析 (phylogenetic analyses)，發現此等序列均同屬NeLV 群組，而火球花分離株則自成1 個類緣分支。由上述血清學及核酸分子鑑定、類緣分析結果顯示，自火球花上所分離之HM4 及其他選殖株均為NeLV 之成員。本試驗亦證實，利用對應NeLV 金花石蒜分離株之抗血清於indirect ELISA 及西方墨點法等免疫檢測中，可順利檢測火球花、金花石蒜、孤挺花及水仙等不同寄主受NeLV 感染之樣品。且其結果與利用HM4 核酸序列所設計之引子對 (NeLV552u/NeLV552d) 進行RT-PCR 檢測之結論相符。本研究於2006–2014 年期間以indirect ELISA 法調查台灣地區火球花等4 種石蒜科花卉之NeLV 感染率 [(檢出數/樣品數)× 100%]，結果分別為火球花18.4%、金花石蒜32%、孤挺花79% 及水仙13.3%，且印證受NeLV 單獨感染者均未顯現病徵。經血清學與分子生物學鑑定結果，本研究亦首次證實火球花為NeLV 之天然寄主。

關鍵字：火球花病毒病、納麗石蒜潛隱病毒、血清檢測、RT-PCR 檢測、類緣分析

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