作者：陳金枝*、江芬蘭、黃春惠

摘要：

本研究於進口宮燈百合 (Sandersonia aurantiaca Hook) 檢測出一種Potyvirus 屬病毒，經鞘蛋白 (coat protein; CP) 核酸序列分析，確認其乃屬於嘉蘭條斑嵌紋病毒 (Gloriosa stripe mosaic virus; GSMV) 成員，分離株代號CB。CB 分離株以反轉錄-聚合酶鏈鎖反應 (reverse transcription-polymerase chain reaction; RT-PCR)法由其核酸3’ 端之polyA 起始，往5’ 端以不同引子對分段增幅，進而選殖其核酸片段進行定序，共解得9,455 個核苷酸，其內包含對應全長度大蛋白之9,156 個核苷酸 (對應3,052 個胺基酸)，相關序列已登錄於GenBank 並取得登錄序號為EF427894。對應CB 分離株之CP 有798 個核苷酸，可轉譯出266 個胺基酸。本研究由宮燈百合和火焰百合 (即嘉蘭) (Gloriosa spp.) 另分別定序得到5 個GSMV 分離株的CP 核苷酸序列，並均登錄於GenBank 取得序號，包括來自宮燈百合的CB4 (KT764122) 和CB18 (KT764123)；來自火焰百合的GL2 (KT764120)、GL3 (KT764124) 和GL4 (KT764121)。所有分離株與國外已登錄之火焰百合GSMV 分離株 (EU042761) 間，CP 胺基酸序列相同度介於86.5–94.0%，均屬於GSMV 成員。而由類緣關係顯示，來自3 個宮燈百合GSMV 分離株間有較相近的分群。依據CB-CP 核苷酸序列設計3 組引子對 (上游引子分別為GSMV715u、GSMV660u 及GSMV500u，搭配共同下游引子GSMVd)，以GSMV660u/GSMVd及GSMV500u/GSMVd 兩組引子對，於RT-PCR 法中均可檢測出宮燈百合和火焰百合上之GSMV；而GSMV715u/GSMVd 僅可檢測到宮燈百合GSMV，對感染火焰百合之GSMV 則無預期片段被增幅出，此引子對可應用於宮燈百合GSMV 之鑑別性檢測。將CB-CP 全長度核苷酸選殖於表現載體pET28b 上，轉型於Escherichia coli strain Rosetta (DE3) 宿主內誘導表現蛋白之生成，將預估分子量約31.6 kDa 之細菌表現蛋白純化後，經兔免疫注射而獲得對應CB-CP 之多元抗體。於indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)和西方墨點法中，此CB 多元抗體可與同源抗原 (CB-CP 表現蛋白) 產生反應，也可成功檢出宮燈百合和火焰百合之GSMV 罹病組織。GSMV 為文獻上發生於火焰百合之病毒記錄，但於宮燈百合上為首次發現，本研究並為首度完成GSMV 全長度核酸定序者。本研究所製備之GSMV 引子對及多元抗體，均已應用於進口宮燈百合種球之病毒監測，可提升我國對GSMV 之自主檢測能力。

關鍵字：宮燈百合、嘉蘭條斑嵌紋病毒、全長度核酸序列、RT-PCR 檢測、多元抗體

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