作者：許育嘉、古新梅、王強生*

摘要：

基因組中DNA甲基化程度與基因表現密切相關，因此，逐漸受到重視。目前有兩類技術運用於DNA甲基化程度的研究，包括非重亞硫酸鹽 (non-bisulfite) 和重亞硫酸鹽 (bisulfite) 的方法。在不使用重亞硫酸鹽處理之DNA甲基化分析，是結合AFLP的技術，配合對甲基化敏感的限制酵素之使用，稱甲基敏感擴增多型性方法 (MSAP)，此方法乃是利用酵素對於不同甲基化程度辨識的差異，判斷特定DNA序列之甲基化形式，為完全甲基化或是未甲基化，此方法主要受限於只能研究在同辨識位中所出現的胞嘧啶，不能測定到某些胞嘧啶受甲基化的情形，會導致低估DNA甲基化的程度。在使用重亞硫酸鹽分析DNA甲基化方面，以甲基特異PCR方法 (MSP) 為最廣泛應用於CpG島甲基化的研究，此方法成功的關鍵在於引子的設計，由於此法具有高靈敏度，所以能允許偵測微量樣品DNA甲基化的情形，甚至包括由埋蠟或是顯微解剖來的組織均可分析。甲基化敏感的單核苷酸引子延長反應法 (Ms-SNuPF) 是藉由單一核苷酸引子，在處理過重亞硫酸鹽的DNA上進行擴增，可以評估特定CpG島甲基化的不同，此法能進行定量分析，不需利用限制酵素，能藉由利用多個引子的策略，在引子擴增反應下，分析多個CpG位置，由於需仰賴放射性強度的測定，靈敏度較差為此方法的主要缺點。組合重亞硫酸鹽限制分析法 (COBRA)，為一個定量技術，它能測定小量基因組DNA中，特定基因座DNA甲基化的程度，由於此法能針對DNA甲基化的情形作準確的定量分析，並可大量分析樣品與應用在埋蠟切片組織的分析，所以在DNA甲基化分析的領域已受到重視。

關鍵字：甲基化、CpG島、重亞硫酸鹽、非重亞硫酸鹽

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