作者：陳金枝*、廖家翌、廖敏伶、劉逸琪、江芬蘭

摘要：

本研究鑑定進口陸蓮花 (<i>Ranunculus asiaticus</i>) 切花上引起葉片嵌紋徵狀之病毒，病葉樣品為行政院農業委 員會動植物防疫檢疫局新竹分局於輸入檢疫取樣之荷蘭進口陸蓮花。初步以花卉病毒多元抗體進行間接式酵 素連結免疫吸附反應 (indirect enzyme-linked immunosorbent assay; indirect ELISA) 檢測，受測樣品均與 potyvirus 單元抗體 (Agdia Inc., Elkhart, IN, USA) 產生正反應，並能與potyvirus 簡併式引子對 [HRP-5/Oligo-dT(14)] 於 RT-PCR 反應中產生預估大小約1.3 kbp 之核酸片段，經選殖與定序鑑定後，乃屬於ranunculus mild mosaic virus (RanMMV) 之核酸序列，並與 GenBank 上已登錄之 RanMMV (Accession No. LC387972) 之鞘蛋白核苷 酸及胺基酸序列有高達 98.6% 以上之相同度，屬相同病毒之分離株。於 reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) 檢測中，本研究所設計的 RanMMV 引子對 (RanMM-u/RanMM-d) 均可由葉片呈現嵌紋徵狀 的陸蓮花切花和罹病種球組織檢出1.04 kbp 之核酸片段產物。進一步將解得之RanMMV 鞘蛋白核酸序列共 825 個核苷酸以基因合成法構築於 pET28a(+) 表現載體上，再於<i> Escherichia coli </i>BL21 宿主中進行鞘蛋白之誘 導 ( 分子量約 30.5 kDa)，並將其作為抗原以製備 RanMMV 之多元抗體，可成功用於進口陸蓮花切花及種球 上對 RanMMV 之檢測。本研究為首次於邊境截獲國外的陸蓮花病毒 RanMMV，國內尚未有此病毒之發生， 本研究成功研製之 RanMMV 核酸及免疫檢測技術，將可提升對進口陸蓮花之邊境檢疫效能。 

關鍵字：陸蓮花、馬鈴薯 Y 屬病毒、多元抗體、RT-PCR 檢測

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