作者：陳金枝*、蔡志濃、陳美雅、廖家翌、江芬蘭

摘要：

本研究由苗栗所採集的草莓 (Haemanthus multiflorus Martyn.) 葉片呈現褐色嵌紋病徵或無徵狀者，以自行設計可涵蓋草莓輕型黃邊病毒 (strawberry mild yellow edge virus; SMYEV) 全長度鞘蛋白基因之上下游引子對(SMYCPu/SMYCPd)，利用反轉錄-聚合酶鏈鎖反應法 (reverse transcription-polymerase chain reaction; RT-PCR) 可增幅出預估約838 bp的核酸片段，經核苷酸定序分析後，確認係屬SMYEV。本研究另設計SMY273u/SMY273d 引子對，進行RT-PCR 以作為田間草莓SMYEV 的發生調查，於苗栗和台中霧峰等地檢出SMYEV之比率約為10.6%。本研究另開發SMYEV多元抗體，將SMYEV-CP約726個核苷酸序列選殖於表現載體pET28a (+) 上，轉型於Escherichia coli strain Rosetta (DE3) 細胞內，誘導表現分子量約26.7 kDa之融合性蛋白，將此表現蛋白純化後做為抗原以製備進行多元抗體。於西方墨點法分析中，自製 (#206) 和市售SMYEV多元抗體 (Bioreba Ltd., Reinach, Switzerland) 均可與本研究所表現之SMYEV-CP蛋白及市售SMYEV正對照品於預估分子量位置產生正反應，且自製之多元抗體可成功檢出草莓植株上之SMYEV，而不會與草莓健康組織有非專一性反應；在間接式酵素連結免疫吸附分析法 (indirect enzyme-linked immunosorbent assay; indirect ELISA) 反應中，受測草莓樣品之SMYEV正反應讀值 (A_405nm) 均在0.15−0.21之間，而相同樣品以市售抗體檢出者之讀值也僅在0.26−0.54間，可能因為草莓內之病毒濃度或多元抗體之力價低所致。本研究乃首次於國內草莓檢出SMYEV病毒，且完成此病毒分離株之分子鑑定。所研發之SMYEV多元抗體及RT-PCR檢測法，除了建立對草莓SYMEV之自主檢測能力外，更可應用於提升草莓健康種苗之生產品質。

關鍵字：草莓輕型黃邊病毒、分子鑑定、多元抗體、RT-PCR檢測

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