作者：鄭櫻慧*、陳金枝、王昭月、江佳典、張清安

摘要：

辣椒葉脈斑駁病毒 (chilli veinal mottle virus; ChiVMV) 和番椒葉脈斑駁病毒 (pepper veinal mottle virus; PVMV) 都是茄科番椒屬作物的Potyvirus屬病毒，且在potyviruses 中，二者的鞘蛋白相似度最高，因此有高強度抗血清相關性，即利用純化病毒或鞘蛋白製備的多元抗體無法區分此二病毒。比對ChiVMV 與PVMV的鞘蛋白基因與3' 非轉譯區，以鞘蛋白N 端與3' 非轉譯區差異最大。因3' 非轉譯區長度差異大，以此區域設計專一性引子進行反轉錄聚合酶連鎖反應 (reverse transcription-polymerase chain reaction; RT-PCR)，利用增幅產物分子量大小不同，可以區分此二病毒。製備專一性抗血清則利用ChiVMV 與PVMV 之鞘蛋白N端差異大區域，以ChiVMV 之鞘蛋白N 端39 個胺基酸 (4.3 kDa)，後接綠色螢光蛋白 (28.2 kDa)，使其成為複合蛋白加大分子量加強免疫反應，再以pET-28b (+) 為表現載體，於Escherichia coli Rosetta 產生一32.5 kDa 之複合表現蛋白。大量表現此複合蛋白，加以純化後進行白兔免疫注射，獲得之多元抗體，進行enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) 或西方漬染法，均可正確檢出感染ChiVMV 之材料，而不與PVMV 感染的煙草、甜椒和健康植株反應。用在檢測田間樣本時，與純化病毒製備之抗血清比較，可正確區分樣本是否為ChiVMV 感染。比起製備單元抗體，利用細菌表現蛋白製備專一性多元抗血清，可不須經過繁複的步驟即可快速且簡便地得到ChiVMV 專一性多元抗血清。

關鍵字：辣椒葉脈斑駁病毒、表現蛋白、多元抗體

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